Western Blot（WB）又稱(chēng)蛋白質(zhì)免 疫印跡法，是基于蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳分離和特異性抗體識(shí)別蛋白的特性，通過(guò)顯色技術(shù)檢測(cè)目的蛋白的技術(shù)。

蛋白質(zhì)免 疫印跡法（WB）轉(zhuǎn)膜流程：
小心撬開(kāi)電泳凝膠板，裁取整塊分離膠并放入預(yù)冷的濕轉(zhuǎn)緩沖液，選取大小適當(dāng)?shù)?/span>NC膜，按“三明治”的形式從上到下依次擺放2層海綿、2張濾紙、分離膠、NC膜（或PVDF膜）、2張濾紙、2層海綿，組裝濕轉(zhuǎn)系統(tǒng)，灌滿預(yù)冷1× 濕轉(zhuǎn)緩沖液，沒(méi)過(guò)“三明治”，室溫100 V濕轉(zhuǎn)60 min；
 
tips：

1、濕轉(zhuǎn)液需提前預(yù)冷，筆者習(xí)慣電泳開(kāi)始時(shí)將濕轉(zhuǎn)液置入制冰器或者-20℃冰箱；

2、轉(zhuǎn)模時(shí)好整塊分離膠轉(zhuǎn)膜，以免裁膠時(shí)丟失部分蛋白；

3、做“三明治”的基本原則是“黑膠白膜”，即分離膠貼近濕轉(zhuǎn)夾黑色面、NC膜貼近濕轉(zhuǎn)夾白色面（或紅色面）；

4、在制備“三明治”時(shí)，筆者習(xí)慣膜在下方、膠在上方，如此蛋白條帶順序和SDS-PAGE正面時(shí)的上樣順序完全一致，方便記憶；

5、濕轉(zhuǎn)液好是現(xiàn)配現(xiàn)用，但也可重復(fù)使用，pubmed有團(tuán)隊(duì)證實(shí)濕轉(zhuǎn)液可重復(fù)使用5次，而不明顯影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；

6、濕轉(zhuǎn)時(shí)，好在冰箱/冷室（cold room）或者置于冰盒中，在電泳時(shí)間小于1h時(shí)，筆者習(xí)慣預(yù)冷濕轉(zhuǎn)液、室溫轉(zhuǎn)膜；

7、濕轉(zhuǎn)條件亦有選擇恒流的，比如200mA，2h等，筆者所使用的濕轉(zhuǎn)條件對(duì)分子量為15-140kd的蛋白均適用；

8、PVDF膜需用甲醇預(yù)激（數(shù)秒鐘即可），使得PVDF帶正電，能更好地與帶負(fù)電的蛋白結(jié)合，而NC膜無(wú)需預(yù)處理;i、制作“三明治”時(shí)注意排除SDS-PAGE膠與NC膜之間的氣泡。