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PCR反應(yīng)出現(xiàn)非特異性擴增分析
日期：2025-01-08 15:47
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摘要：
出現(xiàn)非特異性擴增：PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶與非特異性擴增帶。
（1） 引物與靶序列不完全互補或引物聚合形成二聚體。
（2） Mg2+離子濃度過高。
（3） 退火溫度過低。
（4） PCR循環(huán)次數(shù) 過多有關(guān)。
（5） 酶的質(zhì)和量，往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn)，酶量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴增。
其對策有：必要時重新設(shè)計引 物。減低酶量或調(diào)換另一來源...
出現(xiàn)非特異性擴增：PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶與非特異性擴增帶。
（1） 引物與靶序列不完全互補或引物聚合形成二聚體。
（2） Mg2+離子濃度過高。
（3） 退火溫度過低。
（4） PCR循環(huán)次數(shù) 過多有關(guān)。
（5） 酶的質(zhì)和量，往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn)，酶量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴增。
其對策有：必要時重新設(shè)計引 物。減低酶量或調(diào)換另一來源的酶。降低引物量，適當(dāng)增加模板量，減少循環(huán)次 數(shù)。適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點法（93℃變性，65℃左右退火與延伸）。