介紹ELISA試劑盒陰性與陽性對(duì)照
陽性對(duì)照品(positive control)和陰性對(duì)照品(negative control)是檢驗(yàn)試驗(yàn)有效性的控制品,同時(shí)也作為判斷結(jié)果的對(duì)照,因此對(duì)照品,特別是陽性對(duì)照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測(cè)標(biāo)本的組成相一致.以人血清為標(biāo)本的測(cè)定,對(duì)照品也為人血清,因?yàn)檎H搜逶诟鞣NELISA模式中可產(chǎn)生不同程度的本底.由于大量正常人血比較難得到,elisa試劑盒國(guó)外試劑盒中的對(duì)照品多以復(fù)鈣人血漿(recalcified human plasma)為原料,即在血漿中加入鈣離子,使其中的纖維蛋白質(zhì)凝固,除去凝塊后所得的液體,其組成與血清相似.陰性對(duì)照品須先行檢測(cè),確定其中不含待測(cè)物質(zhì).例如HBsAg檢測(cè)的陰性對(duì)照品中不可含HBsAg,抗HBs也是陰性.陽性對(duì)照品多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì),其中加入一定量的待檢物質(zhì),此量在試劑說明書中標(biāo)明.加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱,在測(cè)定中得到的吸光值與受檢標(biāo)本吸光值比較,可對(duì)標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有一個(gè)粗略的估計(jì).ELISA試劑盒國(guó)外檢測(cè)HBsAg的檢測(cè)敏感度約為0.5ng/ml,陽性對(duì)照品中含量約為10ng/ml.在對(duì)照品中一般加入(antibiotic)和防腐劑,以利保存.
ELISA試劑盒定量測(cè)定的(例如甲胎蛋白質(zhì)癌胚抗原測(cè)定等)應(yīng)含有制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用的參考標(biāo)準(zhǔn)品,應(yīng)包括覆蓋可檢測(cè)范圍的4-5個(gè)濃度,一般均配入含蛋白保護(hù)劑及防腐劑的緩沖液中. ELISA試劑盒陰性對(duì)照及陽性對(duì)照:陰 陽性對(duì)照若有正確的結(jié)果,對(duì)試劑盒操作的結(jié)果可以有粗略的判斷.空白對(duì)照:對(duì)ELISA試劑來說,空白對(duì)照實(shí)際上是不加標(biāo)本不加酶做對(duì)照.空白對(duì)照主要測(cè)系統(tǒng)的吸光率.空白對(duì)照在單波長(zhǎng)測(cè)量時(shí)顯得尤其重要.