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蛋白質(zhì)鹽析與透析實驗步驟
日期：2025-01-08 18:23
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摘要：
1.透析袋的預處理
為防干裂，新透析袋出廠時常用10%甘油進行處理，并含少量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，需除去。將透析袋剪成100～120mm的小段，用50%乙醇煮沸1h，再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氫鈉和0.001mol/LEDTA溶液洗滌，后用蒸餾水沖洗3～5次(新透析袋如不作上述特殊處理，也可用沸水煮5～10min，再用蒸餾水洗凈即可使用)。透析袋一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可用特殊的透析袋夾夾緊，從另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查是否有滲漏，沒有滲漏后方可使用。處理好的透析袋保存于蒸餾水中待用。
2.蛋白質(zhì)鹽析
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1.透析袋的預處理
為防干裂，新透析袋出廠時常用10%甘油進行處理，并含少量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，需除去。將透析袋剪成100～120mm的小段，用50%乙醇煮沸1h，再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氫鈉和0.001mol/LEDTA溶液洗滌，后用蒸餾水沖洗3～5次(新透析袋如不作上述特殊處理，也可用沸水煮5～10min，再用蒸餾水洗凈即可使用)。透析袋一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可用特殊的透析袋夾夾緊，從另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查是否有滲漏，沒有滲漏后方可使用。處理好的透析袋保存于蒸餾水中待用。
2.蛋白質(zhì)鹽析
取10%雞蛋清溶液5mL于試管中，加入等量飽和硫酸銨溶液，微微搖動試管，使溶液混合后靜置數(shù)分鐘，蛋清蛋白質(zhì)即可析出。如無沉淀可再加少許飽和硫酸銨溶液，觀察蛋白質(zhì)的析出。取少量沉淀的蛋白質(zhì)，加水稀釋，觀察沉淀是否會再次溶解。
3.蛋白質(zhì)的透析
注入含雞蛋清的氯化鈉蛋白質(zhì)溶液5mL于透析袋中，將袋的開口端用線扎緊，并懸掛在盛有蒸餾水的燒杯中，開口端位于液面之上。10min后，自燒杯中取出1mL溶液于試管中，加1%硝酸銀溶液一滴，如有白色氯化銀沉淀**，則證明蒸餾水中有Cl-存在。再自燒杯中取出1mL溶液置于另一試管中，加入1mL10%氫氧化鈉溶液，然后滴加1～2滴1%硫酸銅溶液，觀察有無藍紫色出現(xiàn)。每隔20min更換蒸餾水一次，數(shù)小時后可觀察到透析袋內(nèi)出現(xiàn)輕微混濁，此為蛋白質(zhì)沉淀。繼續(xù)透析至蒸餾水中不再**氯化銀沉淀為止。實驗記錄透析完成所需的時間。
注意事項:
蛋白質(zhì)溶液用透析除鹽時，正負離子透過半透膜的速度不相同，如(NH4)2SO4中的?透析速度快，而透析過程中膜內(nèi)的?會**H2SO4，使膜內(nèi)蛋白質(zhì)溶液呈酸性。因此，為避免蛋白質(zhì)變性，用鹽析法純化蛋白質(zhì)時，開始時應用0.1mol/L的NH4OH透析。此外，為了保證蛋白質(zhì)在透析過程中不發(fā)生變性，可以將透析過程置于低溫下進行。
為防干裂，新透析袋出廠時常用10%甘油進行處理，并含少量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，需除去。將透析袋剪成100～120mm的小段，用50%乙醇煮沸1h，再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氫鈉和0.001mol/LEDTA溶液洗滌，后用蒸餾水沖洗3～5次(新透析袋如不作上述特殊處理，也可用沸水煮5～10min，再用蒸餾水洗凈即可使用)。透析袋一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可用特殊的透析袋夾夾緊，從另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查是否有滲漏，沒有滲漏后方可使用。處理好的透析袋保存于蒸餾水中待用。
2.蛋白質(zhì)鹽析
取10%雞蛋清溶液5mL于試管中，加入等量飽和硫酸銨溶液，微微搖動試管，使溶液混合后靜置數(shù)分鐘，蛋清蛋白質(zhì)即可析出。如無沉淀可再加少許飽和硫酸銨溶液，觀察蛋白質(zhì)的析出。取少量沉淀的蛋白質(zhì)，加水稀釋，觀察沉淀是否會再次溶解。
3.蛋白質(zhì)的透析
注入含雞蛋清的氯化鈉蛋白質(zhì)溶液5mL于透析袋中，將袋的開口端用線扎緊，并懸掛在盛有蒸餾水的燒杯中，開口端位于液面之上。10min后，自燒杯中取出1mL溶液于試管中，加1%硝酸銀溶液一滴，如有白色氯化銀沉淀**，則證明蒸餾水中有Cl-存在。再自燒杯中取出1mL溶液置于另一試管中，加入1mL10%氫氧化鈉溶液，然后滴加1～2滴1%硫酸銅溶液，觀察有無藍紫色出現(xiàn)。每隔20min更換蒸餾水一次，數(shù)小時后可觀察到透析袋內(nèi)出現(xiàn)輕微混濁，此為蛋白質(zhì)沉淀。繼續(xù)透析至蒸餾水中不再**氯化銀沉淀為止。實驗記錄透析完成所需的時間。
注意事項:
蛋白質(zhì)溶液用透析除鹽時，正負離子透過半透膜的速度不相同，如(NH4)2SO4中的?透析速度快，而透析過程中膜內(nèi)的?會**H2SO4，使膜內(nèi)蛋白質(zhì)溶液呈酸性。因此，為避免蛋白質(zhì)變性，用鹽析法純化蛋白質(zhì)時，開始時應用0.1mol/L的NH4OH透析。此外，為了保證蛋白質(zhì)在透析過程中不發(fā)生變性，可以將透析過程置于低溫下進行。