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拉丁文： Comamonas│denitrificans

分離基物： 沉積物/表層沉積物

提供形式： 斜面培養(yǎng)物

模式菌株： no

應用領域： 有機污染物降解菌/苯酚、間甲酚降解菌（已驗證）

培養(yǎng)方法：

培養(yǎng)基 33

生長條件 28℃

存儲條件 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍廣的微生物保存法。

菌種保藏方法：

1.斜面低溫保藏法

將菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，待菌種生長完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時間（保藏期）再轉接至新的斜面培養(yǎng)基上，生長后繼續(xù)保藏，如此連續(xù)不斷。此法簡便易行，容易推廣，存活率高，故科研和**上對經常使用的菌種大多采用這種保藏方法。

2.石蠟油封藏法

此法是在無菌條件下，將滅過菌并已蒸發(fā)掉水分的液體石蠟倒入培養(yǎng)成熟的菌種斜面（或半固體穿刺培養(yǎng)物）上，石蠟油層高出斜面頂端lcm，使培養(yǎng)物與空氣隔絕，加膠塞并用固體石蠟封口后，垂直放在室溫或4℃冰箱內保藏。由于液體石蠟阻隔了空氣，使菌體處于缺氧狀態(tài)下，而且又防止了水分揮發(fā)，使培養(yǎng)物不會干裂，因而能使保藏期達1～2年，或更長。但此法不適合厭氧性。

3.砂土管保藏法

適用于產孢子的放線菌、霉菌及形成芽孢的，對于一些對干燥敏感的如奈氏球菌、弧菌和假單胞桿菌及酵母則不適用。砂土管法兼具低溫、干燥、隔氧和無營養(yǎng)物等諸條件，故保藏期較長、效果較好，且微生物移接方便，經濟簡便。它比石蠟油封藏法的保藏期長，約1～10年。

4.麩皮保藏法

此法以麩皮作為載體，吸附接入的孢子，然后在低溫干燥條件下保存。適用于產孢子的霉菌和某些放線菌，保藏期在1年以上。因操作簡單，經濟實惠，工廠較多采用。

5.冷凍真空干燥保藏法

簡稱凍干法，通常采用保護劑制備擬保藏菌種的細胞懸液或孢子懸液于安瓿管中，再在低溫下快速將含菌樣凍結，并減壓抽真空，使水升華將樣品脫水干燥，形成完全干燥的固體菌塊。并在真空條件下立即融封，造成無氧真空環(huán)境，后置于低溫下，使微生物處于休眠狀態(tài)，而得以長期保藏。常用的保護劑有脫脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物質。

6.液氮超低溫保藏法

以甘油、二甲基亞砜等作為保護劑，在液氮超低溫（-196℃）下保藏。其主要原理是菌種細胞從常溫過渡到低溫，并在降到低溫之前，使細胞內的自由水通過細胞膜外滲出來，以免膜內因自由水凝結成冰晶而使細胞損傷。此法操作簡便、高效、保藏期一般可達到15年以上，是目前被公認的有效的菌種長期保藏技術之一。

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