實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：肝癌細胞帶綠色熒光
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS

1:2傳代

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凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
維生素E(VE)elisa檢測試劑盒英文名稱：VE ELISA Kit，英文縮寫：VE，產(chǎn)品別名：維生素E(VE)ELISA檢測試劑盒，維生素E(VE)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

糖蛋白130(gp130)elisa檢測試劑盒英文名稱：gp130 ELISA Kit，英文縮寫：gp130，產(chǎn)品別名：糖蛋白130(gp130)ELISA檢測試劑盒，糖蛋白130(gp130)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)elisa檢測試劑盒英文名稱：HABP ELISA Kit，英文縮寫：HABP，產(chǎn)品別名：透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA檢測試劑盒，透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)elisa檢測試劑盒英文名稱：MPO-ANCA IgG ELISA Kit，英文縮寫：MPO-ANCA IgG，產(chǎn)品別名：髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA檢測試劑盒，髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

受體型酪氨酸蛋白磷酸酶樣N(PTPRN)elisa檢測試劑盒英文名稱：PTPRN ELISA Kit，英文縮寫：PTPRN，產(chǎn)品別名：受體型酪氨酸蛋白磷酸酶樣N(PTPRN)ELISA檢測試劑盒，受體型酪氨酸蛋白磷酸酶樣N(PTPRN)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

腎上腺髓質(zhì)素(ADM)elisa檢測試劑盒英文名稱：ADM ELISA Kit，英文縮寫：ADM，產(chǎn)品別名：腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA檢測試劑盒，腎上腺髓質(zhì)素(ADM)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

沙眼衣原體抗體(CT)elisa檢測試劑盒英文名稱：CT ELISA Kit，英文縮寫：CT，產(chǎn)品別名：沙眼衣原體抗體(CT)ELISA檢測試劑盒，沙眼衣原體抗體(CT)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)elisa檢測試劑盒英文名稱：HSP gp96 ELISA Kit，英文縮寫：HSP gp96，產(chǎn)品別名：熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA檢測試劑盒，熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

清道夫受體B(SRB/CD36)elisa檢測試劑盒英文名稱：SRB/CD36 ELISA Kit，英文縮寫：SRB/CD36，產(chǎn)品別名：清道夫受體B(SRB/CD36)ELISA檢測試劑盒，清道夫受體B(SRB/CD36)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

普通急性細胞白血病抗原(CALLA)elisa檢測試劑盒英文名稱：CALLA ELISA Kit，英文縮寫：CALLA，產(chǎn)品別名：普通急性細胞白血病抗原(CALLA)ELISA檢測試劑盒，普通急性細胞白血病抗原(CALLA)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

凝血因子VIII(FVⅢ)elisa檢測試劑盒英文名稱：FVⅢ ELISA Kit，英文縮寫：FVⅢ，產(chǎn)品別名：凝血因子VIII(FVⅢ)ELISA檢測試劑盒，凝血因子VIII(FVⅢ)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
SMMC7721/GFP細胞JMY  連接介導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白抗體規(guī)格 0.2ml

JMJD7  組蛋白去甲基轉(zhuǎn)移酶JMJD7抗體規(guī)格 0.2ml

JMJD6  凋亡細胞受體抗體規(guī)格 0.2ml

JMJD5  組蛋白去甲基化酶JMJD5抗體規(guī)格 0.2ml

JMJD2A/KDM4A/JHDM3A  組蛋白去甲基化酶JMJ2A抗體規(guī)格 0.2ml

JMJD1B  組蛋白去甲基轉(zhuǎn)移酶JMJD1B抗體規(guī)格 0.1ml

JIP1/MAPK8IP1  絲裂原活化蛋白激酶8相互作用蛋白1規(guī)格 0.2ml
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。