實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：結(jié)腸腺癌細(xì)胞
來(lái)源：結(jié)腸腺癌；女性

培養(yǎng)基：1640

狀態(tài)：貼壁

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
毛鉤藤堿英文名稱： (E)-2-ButenalG蛋白γ13/Gγ13 抗體包裝1g

毛訶子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DodecaneG蛋白γ5/Gγ5 抗體包裝1g

毛花苷C英文名稱：  Decanoic acidG蛋白γ 1/Gγ 1 抗體包裝250mg

毛蘭素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dimethyl adipate鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白2抗體包裝5g

毛里求斯排草素英文名稱： Dibutyl maleate鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白3樣蛋白抗體包裝100ml

毛兩面針?biāo)赜⑽拿Q： Dimethyl sulfoxide溶酶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白抗體包裝500ml

毛蕊異黃酮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： n-Decyl alcohol溶酶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白抗體包裝100g

毛蕊異黃酮苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Diethyl succinate促性腺釋放2抗體包裝25g

茅膏菜（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Diethyl sebacate氨基葡萄糖6-硫酸酯酶抗體包裝500g

沒(méi)食子兒茶素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Docosane高爾基體膜相關(guān)蛋白抗體包裝1g

沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dotriacontane高爾基體膜相關(guān)蛋白5抗體包裝25g

沒(méi)食子酸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 1-Heptanol高爾基體膜相關(guān)蛋白7抗體包裝5g

沒(méi)食子酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 4-Hydroxybutanoic acid lactone高爾基復(fù)合體CFR1抗體包裝100g

沒(méi)食子酸一物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： γ-Heptalactone高爾基體蛋白97抗體包裝25g

沒(méi)食子酰芍藥苷英文名稱： (+)-Fenchone高爾基體蛋白A亞基4抗體包裝100mg
Co-115細(xì)胞葡萄擬莖點(diǎn)霉Human EFHD2(EF-hand domain-containing protein D2) ELISA KitAlias: EFHD2|SWS1|Swiprosin-1ELISAKitReactivity: Human

灰葡萄孢(測(cè)序正確）Human C9orf140(Protein C9orf140) ELISA KitAlias: C9orf140|TS|MDEP|Tumorspecificityandmitosisphase-dependentexpressionprotein|p42.3ELISAKitReactivity: Human

根瘤菌Human TNFRSF12A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 12A) ELISA KitAlias: TNFRSF12A|Fn14|TNFRSF12|CD266|CD266antigen|FGF-inducible14|Fibroblastgrowthfactor-inducibleimmediate-earlyresponseprotein14|FN14tumornecrosisfactorreceptorsuperfamilymember12A|tumornecrosisfactorreceptorsuperfamily|member12A|TWEAKR|TweakR|Tweak-receptor|tweak-receptor|typeItransmembraneproteinFn14ELISAKitReactivity: Human

鹽地喜鹽芽孢桿菌Human TEC(Tyrosine-protein kinase Tec) ELISA KitAlias: TEC|PSCTK4|EC2.7.10|EC2.7.10.2|MGC126760|MGC126762|tyrosine-proteinkinaseTec|tecproteintyrosinekinaseELISAKitReactivity: Human

根霉菌Human CDH6(Cadherin-6) ELISA KitAlias: CDH6|K-Cadherin|cadherin6|type2|K-cadherin(fetalkidney)|cadherin|fetalkidney|cadherin-6|KCAD|K-cadherin|K-cadherin(fetalkidney)ELISAKitReactivity: Human

*豬苓Human MC5R(Melanocortin receptor 5) ELISA KitAlias: MC5R|MC5-R|MC-2|MC-2|MC5-R|melanocortin5receptor|melanocortinreceptor5|melanocortin-5receptorELISAKitReactivity: Human

粘質(zhì)沙雷氏菌Human MSH2(DNA mismatch repair protein Msh2) ELISA KitAlias: MSH2|MSH2|COCA1|FCC1|HNPCC|HNPCC1|LCFS2|MutSproteinhomolog2|LCFS2|DNAmismatchrepairproteinMsh2|hMSH2|HNPCC1mutS(E.coli)homolog2(coloncancer|nonpolyposistype1)|LCFS2|mutShomolog2|coloncancer|nonpolyposistype1(E.coli)|MutSproteinhomolog2ELISAKitReactivity: Human

丁香鏈霉菌Human ARC(Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ELISA KitAlias: ARC|ARG3.1|mArc|Activity-regulatedgene3.1proteinhomologELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。