實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：食管腺癌細胞
來源：食管腺癌；胸腔積液轉(zhuǎn)移；男性

培養(yǎng)基：1640

狀態(tài)：貼壁

公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
南沙參（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Triflumuron磷酸化GADD153抗體包裝250mg

南山楂（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： PencycuronG蛋白αS抗體（鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白Gα s）包裝1g

南五味子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Hexythiazox solutionG蛋白β4抗體/鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白β亞基4包裝250mg

鬧羊花素II英文名稱： Hexythiazox solutionG蛋白β2抗體/鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白β亞基2包裝1g

鬧羊花素III英文名稱： Imazalil solutionG蛋白γ2抗體/鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白γ2抗體包裝5g

鬧羊花素V英文名稱： Siduron磷酸化糖原合酶激酶3β抗體包裝100g

鬧洋花（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： SimazineG蛋白偶聯(lián)受體GPR92蛋白抗體包裝25g

擬人參皂苷F11(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Simazine solution己糖6磷酸脫氫酶抗體包裝500g

擬人參皂苷Rh2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱：  Phoxim solutionG蛋白偶聯(lián)受體γ14抗體包裝5g

擬人參皂苷RT5(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Phoxim solution腸高血糖素相關(guān)肽抗體包裝100g

鳥苷酸英文名稱： Pirimicarb solution葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白10抗體包裝25g

尿囊素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pyrazosulfuron腸高血糖素相關(guān)肽抗體包裝500g

檸檬苦素，黃柏內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品,橙皮提取)英文名稱： PretilachlorG蛋白偶聯(lián)受體120抗體包裝1g

檸檬苦素；吳茱萸內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品,吳茱萸提取)英文名稱： Pretilachlor solutionG蛋白偶聯(lián)受體40抗體包裝25g

牛白藤（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Propoxur solution20號染色體開放閱讀框100抗體包裝5g
SEG-1細胞毛木耳Human HOGA1(Probable 4-hydroxy-2-oxoglutaRate aldolase, mitochondrial) ELISA KitAlias: HOGA1|DHDPSL|DHDPS-likeprotein|ProbableKHG-aldolase|Protein569272|Dihydrodipicolinatesynthase-like|Probable2-keto-4-hydroxyglutaRatealdolaseELISAKitReactivity: Human

金龜子綠僵菌Human ZNF654(Zinc finger protein 654) ELISA KitAlias: ZNF654|Melanoma-associatedantigenELISAKitReactivity: Human

死亡谷芽孢桿菌Human ERN1(Serine/threonine-protein kinase/endoribonuclease IRE1) ELISA KitAlias: ERN1|IRE1|IRE1a|Ire1-alpha|hIRE1p|Endoplasmicreticulum-to-nucleussignaling1|Inositol-requiringprotein1|Serine|threonine-proteinkinase|endoribonucleaseIRE1ELISAKitReactivity: Human

傳染性法氏囊病病毒Human TNN(Tenascin-N) ELISA KitAlias: TNNELISAKitReactivity: Human

慢生根瘤菌Human HBP1(HMG box-containing protein 1) ELISA KitAlias: HBP1|HMGboxtranscriptionfactor1|Highmobilitygroupboxtranscriptionfactor1|ELISAKitReactivity: Human

堅強芽孢桿菌Human TSPAN14(Tetraspanin-14) ELISA KitAlias: TSPAN14|HMGboxtranscriptionfactor1|Highmobilitygroupboxtranscriptionfactor1|ELISAKitReactivity: Human

雞傷寒沙門氏菌Human HIST2H2BE(Histone H2B type 2-E) ELISA KitAlias: HIST2H2BE|HistoneH2B-GL105|HistoneH2B.q(H2B|q)ELISAKitReactivity: Human

嗜果刀孢Human DNAH17(Dynein heavy chain 17, axonemal) ELISA KitAlias: DNAH17|Dyneinlightchain2|axonemal|Ciliarydyneinheavychain-likeprotein1|Ciliarydyneinheavychain17|Axonemalbetadyneinheavychain17|Axonemaldyneinheavychain-likeprotein1ELISAKitReactivity: Human
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。