實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：前列腺癌細(xì)胞
來源：BSL-1

培養(yǎng)基：DMEM高糖90%，胎牛血清10%（1521/1531）

狀態(tài)：上皮細(xì)胞

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
鹽酸藥根堿(標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Lysine methyl ester dihydrochloride同源盒蛋白C6抗體包裝10g

鹽酸伊立替康（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Methionine Methyl Ester Hydrochloride同源盒蛋白C4抗體包裝10mg

鹽酸益母草堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Sodium cholesteryl sulfate同源盒蛋白D13抗體包裝50mg

鹽酸育亨賓（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： O-tert-Butyl-L-serine methyl ester hydrochloride組蛋白H1.4樣蛋白抗體包裝5g

羊膽粉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Valine methyl ester hydrochloride 組蛋白H1FOO抗體包裝1g

羊耳菊（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Valinamide hydrochloride 同源盒蛋白B6抗體包裝1g

羊開口（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Cysteamine Hydrochloride錯構(gòu)素蛋白抗體包裝25g

羊奶奶葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Glycinamide hydrochloride磷酸化組蛋白H1FOO抗體包裝5g

楊梅苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： L-4-Hydroxyproline methyl ester hydrochloride單純皰疹病1型轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子ICP22抗體包裝100g

楊梅素-3-O-半乳糖苷英文名稱： D-Leucine methyl ester hydrochlorideH2A組蛋白家族E蛋白抗體包裝25g

楊梅素/楊梅酮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： (s)-2-phenylglycine methyl ester hydrochlorideH2B組蛋白家族M蛋白抗體包裝500g

楊芽黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： H-D-Ala-OEt·HClH2B組蛋白家族成員W蛋白抗體(特異性)包裝1g

洋艾素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： LinagliptinPWWP域包含蛋白1抗體包裝5g

洋川芎內(nèi)酯A（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Glutamic Acid 1-Benzyl Ester高密度脂蛋白抗體包裝5g

洋川芎內(nèi)酯H(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： H-Leu-OEt·HClHEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白1蛋白抗體包裝100g
DU145[DU-145]細(xì)胞泡盛曲霉Human PRSS1(Trypsin-1) ELISA KitAlias: PRSS1(Protease|Serine|1)|PTRYI|TRY4|Trygn16|Trypsinogen1|Beta-trypsin|Cationictrypsinogen|digestivezymogen|nonfunctionaltrypsin1|protease|serine|1(trypsin1)|Serineprotease1|TRP1|TRY1|TRYP1|TrypsinI|trypsin-1|trypsinogen1|trypsinogenAELISAKitReactivity: Human

枯草芽孢桿菌Human NTN4(Netrin-4) ELISA KitAlias: NTN4(Netrin4)|beta-Netrin|Netrin-4|CDY|CDY1A|chromodomainprotein|Ychromosome|1|chromodomainprotein|Y-linked|1|testis-specificchromodomainproteinonY|testis-specificchromodomainproteinY1|Hepar-derivednetrin-likeproteinELISAKitReactivity: Human

漢遜德巴利酵母漢遜變種Human NTN1(Netrin-1) ELISA KitAlias: Ntn1(Netrin1)|netrin-1|Lnetrin1|Mouse|homologofELISAKitReactivity: Human

不解糖鞘氨醇單胞菌Human PRSS1(Trypsin-1) ELISA KitAlias: PRSS1(Protease|Serine|1)|PTRYI|TRY4|Trygn16|Trypsinogen1|Beta-trypsin|Cationictrypsinogen|digestivezymogen|nonfunctionaltrypsin1|protease|serine|1(trypsin1)|Serineprotease1|TRP1|TRY1|TRYP1|TrypsinI|trypsin-1|trypsinogen1|trypsinogenAELISAKitReactivity: Human

Human APOA5(Apolipoprotein A-V) ELISA KitAlias: APOA5(ApolipoproteinA-V)|APOAV|RAP|Apo-AV|ApoA-V|ApolipoproteinA5|RegeneRation-associatedprotein3ELISAKitReactivity: Human

棒曲霉Human NMU(Neuromedin-U) ELISA KitAlias: NMU|Neuromedin-UELISAKitReactivity: Human

麻臉蘑菇Human NTN4(Netrin-4) ELISA KitAlias: NTN4(Netrin4)|beta-Netrin|Netrin-4|CDY|CDY1A|chromodomainprotein|Ychromosome|1|chromodomainprotein|Y-linked|1|testis-specificchromodomainproteinonY|testis-specificchromodomainproteinY1|Hepar-derivednetrin-likeproteinELISAKitReactivity: Human

杏鮑菇Human IL2RB(Interleukin-2 receptor subunit beta) ELISA KitAlias: IL-2Rβ(Interleukin2ReceptorBeta)|IL2RB|CD122|IL-15Rbeta|CD122antigen|highaffinityIL-2receptorbetasubunit|HighaffinityIL-2receptorsubunitbeta|IL-2receptorsubunitbeta|IL-2Rsubunitbeta|IL-2RB|interleukin15receptor|beta|interleukin2receptor|beta|interleukin-2receptorsubunitbeta|p70-75|P70-75|p75ELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。