實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：大細胞肺癌細胞

公司細胞現(xiàn)貨供應，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
鳳仙萜四苷A英文名稱： Cytochalasin B組蛋白基化KMT3B抗體（雄受體激活蛋白）包裝100g

鳳仙萜四苷B英文名稱： Fumagillin from Aspergillus fumigatus離子通道蛋白Kv4.3抗體包裝25g

鳳仙萜四苷C英文名稱： Oligomycin B from StreptomycesKillin-p53調(diào)節(jié)復制抑制蛋白抗體包裝5g

鳳仙萜四苷F英文名稱： Patulin from Penicillium expansum賴氨酸t(yī)RNA的連接酶抗體包裝5MG

鳳仙萜四苷G英文名稱： 3-Bromobenzophenone220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體包裝25g

鳳仙萜四苷K英文名稱： Flumequine 磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體包裝5g

鳳仙萜四苷M英文名稱： Flumequine 基爾曼氏細小病VP1/VP2抗體(大鼠潛在病KRV)C端包裝5mg

佛手（標準品）英文名稱： Oxolinic acid離子通道蛋白家族KCNQ1抗體包裝100g

佛手柑內(nèi)酯(標準品)英文名稱： Sterigmatocystin from Aspergillus Versicolor組蛋白H3 K9基轉(zhuǎn)移酶抗體包裝25g

佛手柑素;香檸檬素;佛手柑亭;香檸檬亭（標準品）英文名稱： Nigericin sodium生物鐘KAT13D蛋白抗體包裝5g

佛司可林(標準品)英文名稱： NonactinKelch樣蛋白36抗體包裝1g

呋拉茶堿英文名稱： Trichostatin A from Streptomyces sp離子轉(zhuǎn)運蛋白KCC4抗體包裝250mg

弗朗鼠李皮（標準品）英文名稱： Acetovanillone磷酸化離子通道蛋白Kv1.3抗體包裝1g

扶芳藤（標準品）英文名稱： Acetovanillone離子通道蛋白家族成員4抗體包裝5g

茯苓（標準品）英文名稱： Polydatin電壓門控性通道蛋白亞基kv5.1抗體包裝250mg
NCI-H460[H460] 細胞枯草芽孢桿菌Human SON (Protein SON) ELISA KITAlias: SONELISAKitReactivity: Human

芽胞桿菌屬Human GPA33(Cell surface A33 antigen) ELISA KitAlias: GPA33|A33|GlycoproteinA33|glycoproteinA33(transmembrane)|transmembraneglycoproteinA33ELISAKitReactivity: Human

米根霉Human ATM(Serine-protein kinase ATM) ELISA KitAlias: ATM(AtaxiaTelangiectasiaMutated)|TEL1|TELO1|TPLL|ATmutated|A-Tmutated|AT1|ATA|ataxiatelangiectasiamutated(includescomplementationgroupsA|CandD)|ATD|ATC|ATDC|ATE|serine-proteinkinaseATM|TEL1|telomeremaintenance1|homologELISAKitReactivity: Human

念珠狀諾卡氏菌Human SORT1(Sortilin) ELISA KitAlias: 100kDaNTreceptor|Glycoprotein95|Gp95|Neurotensinreceptor3|NT3|NTR3|SORT1|Sortilin|sortilin1ELISAKitReactivity: Human

黃暗色鏈霉菌Human CAPN15 (Calpain-15) ELISA KITAlias: CAPN15ELISAKitReactivity: Human

解淀粉芽孢桿菌Human HCN4(Potassium/sodium hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 4) ELISA KitAlias: HCN4(Potassium|sodiumhyperpolarization-activatedcyclicnucleotide-gatedchannel4)|hyperpolarizationactivatedcyclicnucleotide-gatedcationchannel4|hyperpolarizationactivatedcyclicnucleotide-gatedpotassiumchannel4ELISAKitReactivity: Human

球孢白僵菌Human SERBP1 (Plasminogen activator inhibitor 1 RNA-binding protein) ELISA KITAlias: SERBP1ELISAKitReactivity: Human

土曲霉金色變種Human SIGIRR (Single Ig IL-1-related receptor) ELISA KITAlias: SIGIRRELISAKitReactivity: Human
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。