產(chǎn)品名稱:FluA/FluB/BV/BY 亞型流感病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):FS-01P99887
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體,柱式法純化,操作簡(jiǎn)單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3~5μg mtDNA。
注意:本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料,不適合于植物材料,因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
產(chǎn)品組成:
成分 |
規(guī)格 |
溶液A |
13ml |
溶液B |
13ml |
溶液C |
18ml |
離心吸附柱 |
50套 |
通用洗柱液 |
50ml |
DNA洗脫液 |
10ml |
說明書 |
1份 |
使用方法:
一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細(xì)胞預(yù)處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預(yù)處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取
5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?,F(xiàn)象,取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。
13. 重復(fù)上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品:
Ai-Phospho-c-Kit (Tyr719) /FITC 熒光su標(biāo)記磷suan化原癌基因c-kit抗體IgGMulti-class aibodies: 0.2ml
Rabbit Ai-horse IgG 兔抗馬IgG (親和層析純化)Multi-class aibodies: 1mg
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 Ai-GLUT2 0.1ml
Rabbit Ai-Bovine IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗IgM 0.3ml
FAM104B 英文名稱: FAM104B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus aibody Rh phospho-SHC(Tyr239/240) 磷suan化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體 0.1ml
Rabbit Ai-horse IgG 兔抗馬IgG (親和層析純化)Multi-class aibodies: 1mg
MDM2 (urine double minute 2) 雙微體2癌基因抗原Multi-class aibodies: 0.5mg
Ai-Amylin 糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體Multi-class aibodies: 0.1ml
Rhesus aibody Rh phospho-B-Raf (Ser365) 磷suan化B-Raf抗體 0.1ml
Tris- HCl緩沖液 100ml 0.5mol/L pH7.6
VEGF-A 英文名稱: 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A抗體 0.1ml
DUOX1 英文名稱: 雙氧化mei1/甲狀腺氧化mei1抗體 0.2ml
Ai-Amylin 糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體Multi-class aibodies: 0.1ml
SNAI2 英文名稱: 鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體 0.1ml
EPHX2 英文名稱: 胞漿環(huán)氧化物水解mei抗體 0.1ml
尿suan鹽轉(zhuǎn)運(yùn)子抗體 Ai-UAT 0.1ml
Ai-TRPM2 /FITC 熒光su標(biāo)記瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白抗體(M亞家族)IgGMulti-class aibodies: 0.2ml
Rhesus aibody Rh phospho-ILK-1(Thr173) 磷suan化整合su連接激mei1抗體 0.1ml
CaMK2a(calcium/calmodulin-depende protein kinase II alpha) 鈣/鈣調(diào)su依賴蛋白激mei2α抗原Multi-class aibodies: 0.5mg
FluA/FluB/BV/BY 亞型流感病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒銅粉(>99.5%,BR)甘草su人體(apolipoprotein)RFLP基因分析試劑盒
式碳suan銅(銅純度:52.5~56.5%)大黃suan人體EIF-2AK3 RFLP基因分析試劑盒
氧化銅粉(>99%,BR)大黃su人體BRCA-2 RFLP基因分析試劑盒
焦磷銅大黃su甲人體FACTOR V RFLP基因分析試劑盒
銅三水(>98%,BR)大黃酚人體HLA-A(EXON2)RFLP基因分析試劑盒
2'-脫氧腺5'二磷suan三鈉鹽(>97%,BR)蘆薈大黃su人體Caveolin-1 RFLP基因分析試劑盒
2'-脫氧胞-5'-二磷suan三鈉鹽(分子生物學(xué)級(jí))楊梅su人體CYCLIN D1 RFLP基因分析試劑盒
(>98%,BR)二氫楊梅su人體CYP1A2 RFLP基因分析試劑盒