商品屬性：
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貨號 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
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A-Hc2213-20 次 |
20 次 |
pBM28 Toposmart 克隆試劑盒 |
儲存條件：
pBM28 Toposmart 克隆試劑盒保存條件：-20℃保存。
產(chǎn)品介紹：
利用痘苗病毒的拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的特點將PCR產(chǎn)物定向克隆到線性化的pBM28載體中。適用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5 等高保真DNA聚合酶擴(kuò)增的平末端PCR產(chǎn)物。pBM28 載體類似于公司的pENTR/D-TOPO入門載體， 具有attL1 和attL2，為gateway系統(tǒng)中的入門載體。引物M13F(-21)和M13R可用于菌落PCR和測序鑒定。
產(chǎn)品特點：
（1）連接反應(yīng)僅需 5 分鐘。
（2）只適合平末端 PCR 產(chǎn)物的快速、高效、定向克隆。
（3）載體采用了新的制備工藝，零背景，無需藍(lán)白斑篩選。
（4）與pBM27載體相比，pBM28載體無標(biāo)簽序列。
（5）載體為壯觀霉素抗性。
注意事項：
（1）引物要求：PCR 引物5’端不能進(jìn)行磷酸化修飾，普通商業(yè)化引物即可。上游引物的5’ 端添加CACC 四個堿基（CACC 為真核表達(dá)所必需的Kozak 序列）。
（2）DNA 聚合酶：選用Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和Xerox 等高保真DNA 聚合酶用于PCR 擴(kuò)增。
（3）連接時間：5-15 分鐘，一般為 15 分鐘。
（4）連接溫度：室溫 (22℃-37℃)，可使用PCR儀控溫。*佳反應(yīng)溫度為25℃。若片段有高GC等復(fù)雜結(jié)構(gòu)，可在37℃反應(yīng)。
（5）產(chǎn)物要求：為保證PCR產(chǎn)物完整，建議72℃后延伸5-10分鐘。連接前使用瓊脂糖凝
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