商品屬性：
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貨號(hào) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
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A-Hc2230-20 μl |
20 μl |
pPIC9K Seamless Cloning Kit（線性化質(zhì)粒） |
儲(chǔ)存條件：
pPIC9K Seamless Cloning Kit（線性化質(zhì)粒）保存條件：-20℃保存
產(chǎn)品介紹：
pPIC9K為畢赤酵母表達(dá)載體，載體能夠使用的畢赤酵母宿主菌。 pPIC9載體大小9276 bp，是融合表達(dá)載體，利用alpha因子分泌信號(hào)肽，分泌表達(dá)蛋白基因。在畢赤酵母中利用HIS4進(jìn)行篩選。在載體構(gòu)建過(guò)程中，目的基因必須保證與信號(hào)肽的起始密碼子的讀碼框一致。本產(chǎn)品提供pPIC9K經(jīng)EcoRⅠ酶切后的線性化載體，可用無(wú)縫克隆技術(shù)將單個(gè)或多個(gè)DNA片段組裝到載體上。
無(wú)縫克隆技術(shù)可在重組酶的作用下，只需一步反應(yīng)，便可將片段克隆到任何載體中的任意位置，得到重組質(zhì)粒。無(wú)縫克隆技術(shù)作為一種非常強(qiáng)大的克隆技術(shù)，具有快速、簡(jiǎn)便、高效、多片段組裝和定向克隆等特點(diǎn)，用于單個(gè)DNA片段的克隆，多個(gè)DNA片段組裝克隆以及多位點(diǎn)突變構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. pPIC9K為畢赤酵母表達(dá)載體，載體能夠使用的畢赤酵母宿主菌。
2. pPIC9載體利用alpha因子分泌信號(hào)肽，分泌表達(dá)蛋白基因。
3. 在畢赤酵母中利用HIS4進(jìn)行篩選。
4. 無(wú)縫克隆技術(shù)只需要簡(jiǎn)單的 PCR 擴(kuò)增就可以制備片段DNA。
5. 可以克隆長(zhǎng)片段和多片段DNA。
操作步驟：
1. pPIC9K線性化載體使用方法：
(1) pPIC9K線性化載體當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴(kuò)增PCR產(chǎn)物的
上游引物 5’端添加序列：GAGAGGCTGAAGCTTACGTAGAATTC
下游引物 5’端添加序列：GCGAATTAATTCGCGGCCGC
通過(guò)無(wú)縫克隆連接到pPIC9K中。
(2) 測(cè)序引物
AOX1-F:GACTGGTTCCAATTGACAAGC或alpha-Factor-F:TACTATTGCCAGCATTGCTGCAOX1-R:GCAAATGGCATTCTGACATCC
(3) pPIC9K線性化載體為 EcoRⅠ酶切后的線性化載體，圖譜及多克隆位點(diǎn)
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