商品屬性:
貨號 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
A-PJ1017-100Tx25μl |
100Tx25μl |
HotStart Bst 4.2 SYBR Green Bead(熒光凍干球) |
儲存條件:
HotStart Bst 4.2 SYBR Green Bead(熒光凍干球)儲存:-20℃干燥密封保存 24 個月;室溫(25℃)密封保存 12 個月。避免受潮。
產(chǎn)品介紹:
本品為 LAMP 熒光檢測專用的試劑,制品為全體系凍干微球制品,包含了 HotStart Bst4.2 DNA/RNA 聚合酶、SYBR Green 染料、Helicaser、dNTP、Mg2+、反應緩沖鹽,單球擴增體系為 25 μl。
Bst4.2 具有以下性能:
(1)Bst 4.2 全系包含熱啟動Aptamer,該配體確保酶在<30℃時,酶活封閉效率>95%,在>60℃時 1min 內(nèi)完全釋放酶活。該特性利于室溫建立反應體系,并大幅降低了低溫條件下的非特異擴增;
(2)反應溫度提升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高擴增特異性,并使得粗樣品核酸釋放更加充分;
(3)全系包含 Helicaser,因此,允許在不使用 F3/B3 引物的情況下進行 LAMP 擴增(easy LAMP),并允許 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。這將進一步降低非特異擴增,并使得擴增均一性大幅提升。
特殊說明:
(1) Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴增時的推薦反應溫度為 65-70℃,*佳反應溫度為 70℃。因此其可完全替代 的 Bst4.0 系列,用于標準 LAMP的擴增。
(2) 由于 Helicaser 的反應溫度為 70℃,因此在進行eLAMP 擴增時,反應溫度為 70℃。
(3)制品中包含高濃度的鹽組分,使用時做好個人防護,防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入,一旦接觸或吸入,請用大量的清水沖洗。
(4)防止氣溶膠污染,盡可能進行分區(qū)操作。
1. 標準 LAMP 和 eLAMP 擴增的區(qū)別本試劑既可以用于標準 LAMP 擴增,也可以用于 eLAMP擴增。
1.1 10x 標準 LAMP Primer MixFIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 10xeLAMP Primer MixFIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each
注意:eLAMP(easy LAMP)為去除 F3/B3 引物的方法,為 Bst4.2系列專用的使用策略,對于大多數(shù)引物組,在 Helicaser 的加持下,擴增速度幾乎不受影響。如引物擴增效率低,可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16 μM。
1.3 擴增溫度不同
標準 LAMP 擴增 eLAMP 擴增
65-70°C 均可 70°C 反應
2. 配制 LAMP 反應體系
HotStart Bst 4.2 SYBR Green Bead 1 個
10x Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
反應體系配好后,置于 65-70°C 反應 20~30min,1min 收集一次熒光信號。讀取擴增曲線進行陰性和陽性判讀。
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