商品屬性:
貨號(hào) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
A-PJ1077-25T |
25T |
Hi T7高產(chǎn)RNA合成試劑盒 |
儲(chǔ)存條件:
Hi T7高產(chǎn)RNA合成試劑盒-20℃可保存 2 年,避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品介紹:
Hi T7 高產(chǎn) RNA 合成試劑盒可在體外高效合成多種類(lèi) 型的 RNA 如 mRNA、lncRNA、shRNA 等。利用 Hi T7 RNA 聚合酶識(shí)別 T7 promoterTTCTAATACGACTCACTATAG G)以方框中 G 堿基為起點(diǎn)開(kāi)始轉(zhuǎn)錄,該試劑盒可以從少量 樣本得到高效轉(zhuǎn)錄,單次反應(yīng)可獲得高達(dá) 150-200 μg 的產(chǎn) 物,轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度可達(dá) 4000nt 以上。 利用該試劑盒得到的 RNA 適用于多種下游應(yīng)用,如 RNA 結(jié)構(gòu)和功能研究、核酸酶生物化學(xué)研究、RNase 保護(hù) 分析探針、印跡雜交、反義 RNA 及 RNAi 實(shí)驗(yàn)、微陣列 分析、顯微注射、體外翻譯和 RNA 疫苗等。 Hi T7 高產(chǎn) RNA 合成試劑盒使用方便,使用優(yōu)化好的預(yù) 混液,有利于用戶(hù)快速建立反應(yīng)。本試劑盒還配備了 DNase I,在 RNA 合成完畢后可快速去除 DNA 模板,便于獲得高 純度轉(zhuǎn)錄 RNA。
操作步驟:
(1) 按以下組分配制反應(yīng)液
2×Hi T7 Trans Solution 10 μl
DNA(RNase Free) 0.5~1 μg
Hi T7 Trans Enzyme Mix 1.5 μl
RNase Free H2O upto 20 μl
(2)37℃反應(yīng) 4h,轉(zhuǎn)錄 RNA 產(chǎn)量在 120~200 μg。
(3) 轉(zhuǎn)錄完畢后,向反應(yīng)液中加入 2.5 μl 的 10xRD Buffer和 2 μl 的 RNase Free DNase I,37℃孵育 15min,以去除DNA 模板。
(4)整個(gè)反應(yīng)完畢后可取 0.05~0.1 μl 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè),并凍存于-80℃保存。選用 LiCl 沉淀純化或 5min RNAPurification Kit 進(jìn)行轉(zhuǎn)錄 RNA 的純化,以去除鹽、rNTP、蛋白等。
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