(1)原代細胞的培養(yǎng)方法
原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細胞在體外進行的培養(yǎng)，是建立細胞系的步，是一項基本技術。原代細胞接近和能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
商品屬性：
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組織來源 |
肺組織 |
規(guī)格 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細胞分類 |
兔原代細胞 |
培養(yǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；CO2，5% |
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生長特性 |
貼壁 |
細胞形態(tài) |
成纖維細胞樣 |
細胞簡介：
兔肺成纖維細胞分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺器官的正常形態(tài)，合成和釋放細胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
方法簡介：
公司實驗室分離的兔肺成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的兔肺成纖維細胞經(jīng)Vimentin熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠β萘酚(β-naphthol)elisa檢測試劑盒
人堿性亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子ATF樣蛋白(BATF)elisa分析檢測試劑盒
VZV（VARICELLA ZOSTER）病毒標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒
鴨子磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)elisa分析檢測試劑盒
大鼠熱休克蛋白90(HSP-90)elisa檢測試劑盒
小鼠白細胞介素1α(IL-1α/IL-1F1)elisa檢測試劑盒
大鼠5羥二十碳四烯酸(5-HETE)elisa檢測試劑盒
載玻片細胞βCOLLAGEN II蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
人1,25二羥基維生素D3(1,25 DHVD3)elisa檢測試劑盒
細胞色素P450 A7抗體 CYP3A7
細胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體 ELK1
ZMYM1蛋白抗體 ZMYM1
β-新內(nèi)啡肽抗體 Beta neoendorphin
ATP6V0D2蛋白抗體 ATP6V0D2
BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白抗體 Bid
跨膜蛋白SEMA5A抗體 Semaphorin 5A
雷帕霉素靶蛋白重組兔單克隆抗體 mTOR
脂肪細胞增強結(jié)合蛋白1 AEBP1
腫瘤壞死因子配體超家族成員12A（CD266）重組兔單克隆抗體 TNFRSF12A/CD266
肝黃素單加氧酶1抗體 FMO1
高遷移率族蛋白2樣蛋白1抗體 HMG2L1
KIAA1211蛋白抗體 KIAA1211
LSM12蛋白抗體 LSM12
醛縮酶A抗體 Aldolase A
絨毛蛋白抗體 Villin
大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)elisa分析檢測試劑盒
兔肺成纖維細胞大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)elisa分析檢測試劑盒
BACE1 ELISA Kit
人黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)elisa分析檢測試劑盒
MART/Melan-AELISAKit
原代細胞的分離方法：
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機械分散法
特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。