(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的步，是一項(xiàng)基本技術(shù)。原代細(xì)胞接近和能反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，適宜用于敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
商品屬性：
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組織來(lái)源 |
輸精管組織 |
規(guī)格 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細(xì)胞分類 |
人原代細(xì)胞 |
培養(yǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；CO2，5% |
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生長(zhǎng)特性 |
貼壁培養(yǎng) |
細(xì)胞形態(tài) |
長(zhǎng)梭形 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
輸精管是一對(duì)細(xì)長(zhǎng)的管道，左右各一條，每條全長(zhǎng)約 40厘米。輸精管一端與附睪管相通，另一端與精囊腺管匯合后形成射精管，開口于后尿道。輸精管也儲(chǔ)存一部分成熟的精子。輸精管是管壁厚、管腔窄的肌性管道。管壁由黏膜、肌層及外膜3層組成。其中，肌層較厚，由內(nèi)縱、中環(huán)和外縱3層平滑肌組成，主要由平滑肌細(xì)胞構(gòu)成。
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來(lái)源于人正常輸精管組織。
2)細(xì)胞鑒定：α-SMA熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基：
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分泌和跨膜蛋白1抗體 Anti-SECTM1
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NADPH氧化酶活化蛋白1抗體 Anti-NOXA2/p67phox
受精卵抑制蛋白1抗體 Anti-ZAR1/Zygote arrest protein 1
細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體 SMAD1
限制過(guò)度增殖相關(guān)蛋白EML4抗體 EML4
α-甲基?；o酶A消旋酶抗體 AMACR
δ樣蛋白4抗體 DLL4
ATP依賴解旋酶ERCC6抗體 CSB
B細(xì)胞鏈接激活蛋白抗體 NTAL
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鏈霉素抗體 streptomycin
中胚層誘導(dǎo)早期反應(yīng)蛋白2抗體 MIER2
腫瘤抑制基因LPP2抗體 VANGL1
干擾素α2b抗體 Interferon alpha 2b
孤兒核受體抗體 RORC
KMT5A單克隆抗體 KMT5A
MAP7D3蛋白抗體 MAP7D3
染色質(zhì)組裝因子1P55抗體 CAF1p55/VPRBP
溶質(zhì)載體家族蛋白30成員A9抗體 SLC30A9
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原代細(xì)胞的分離方法：
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡(jiǎn)單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機(jī)械分散法
特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。