(1)原代細胞的培養(yǎng)方法
原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細胞在體外進行的培養(yǎng),是建立細胞系的步,是一項基本技術(shù)。原代細胞接近和能反映體內(nèi)生長特性,適宜用于敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
商品屬性:
組織來源 |
小腸組織 |
規(guī)格 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
細胞分類 |
兔原代細胞 |
培養(yǎng)條件 |
氣相:空氣,95%;CO2,5% |
生長特性 |
貼壁培養(yǎng) |
細胞形態(tài) |
長梭狀細胞 |
細胞簡介:
小腸位于腹中,上端接幽門與胃相通,下端通過闌門與大腸相連。小腸與心互為表里。是食物消化吸收的主要場所,盤曲于腹腔內(nèi),上連胃幽門,下接盲腸,全長約 5-6米,張開有半個籃球大,分為十二指腸、空腸和回腸三部分。其管壁外圍有結(jié)締組織,這些結(jié)締組織由成纖維細胞構(gòu)成,對小腸起到支持和保護作用。
細胞特性:
1)組織來源于實驗動物的正常小腸組織。
2)細胞鑒定:纖維連接蛋白(Fibronectin)或波形蛋白(Vimentin)熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式:長梭狀細胞,貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基:
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原代細胞的分離方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料,由于細胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細胞充分分散,形成細胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)機械分散法
特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大,而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀),應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動,使團塊膨松,由塊狀變成絮狀,此時再采用機械法,用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩,使細胞團塊得以較充分的分散,制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液,接種培養(yǎng)后,細胞容易貼壁生長。