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組織來源 |
中耳組織 |
規(guī)格 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細(xì)胞分類 |
小鼠原代細(xì)胞 |
培養(yǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；CO2，5% |
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生長特性 |
貼壁培養(yǎng) |
細(xì)胞形態(tài) |
上皮樣細(xì)胞 |
細(xì)胞簡介：
中耳位于外耳和內(nèi)耳之間，主要結(jié)構(gòu)是鼓膜和聽骨鏈。中耳內(nèi)部不規(guī)則中空的結(jié)構(gòu)表面覆蓋著一層上皮組織，起到物理保護(hù)的作用。
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來源于實驗動物的正常中耳組織。
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白((Pan Cytokeratin)熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：上皮樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基：
我們推薦使用 Delf原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的步，是一項基本技術(shù)。原代細(xì)胞接近和能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于敏感性試驗、細(xì)胞分化等實驗研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
原代細(xì)胞的分離方法：
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機械分散法
特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
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